【飛諾美色譜】治療性寡核苷酸代表了目前制藥行業(yè)的新突破。提高寡核苷酸藥物合成路線的可靠性并且加上新藥輸送技術(shù)在臨床運(yùn)用上會(huì)得到高度的重視。在色譜分析中，寡核苷酸藥物的高極性與其磷酸二酯骨架對(duì)分析來(lái)說(shuō)是一個(gè)極大的挑戰(zhàn)。因此，使用離子對(duì)反相色譜分析（IP-RPLC）是必要的，一般來(lái)說(shuō)，常規(guī)的流動(dòng)相會(huì)使用烷基胺離子對(duì)試劑和全氟醇（如：HFIP）組成。

雖然，通過(guò)優(yōu)化離子對(duì)色譜流動(dòng)相的比例能有效地提高色譜分離的效果，但是這也無(wú)法改變寡核苷酸對(duì)傳統(tǒng)不銹鋼色譜柱硬件中微量金屬的螯合作用。在這里，我們通過(guò)對(duì)兩種合成寡核苷酸的液相質(zhì)譜分析來(lái)對(duì)比傳統(tǒng)不銹鋼色譜柱和BioTi（多層鈦合金柱管提供生物惰性通道）硬件色譜柱對(duì)分析結(jié)果的影響。

當(dāng)通過(guò)LC-MS分析雙鏈RNA的時(shí)候，如圖1所示，我們觀測(cè)到非特定的相互作用。結(jié)果顯示，在反鏈峰被洗脫下來(lái)前我們看到了一個(gè)分叉峰，通過(guò)MS/MS掃描后我們確定這個(gè)分叉峰是同一個(gè)分析物。反之，如圖2所示，通過(guò)使用BioTi生物惰性硬件的色譜柱則有效地清晰分離雙鏈RNA中的正反鏈并且通過(guò)質(zhì)譜數(shù)據(jù)的驗(yàn)證。此外，我們還觀測(cè)到在使用帶有BioTi硬件的色譜柱時(shí)，分析結(jié)果的靈敏度，峰高以及峰面積有顯著的提高。從而表明BioTi能有效地在低濃度離子對(duì)試劑及HFIP條件下對(duì)寡核苷酸進(jìn)行表征分析。

這種在電離方面的改進(jìn)也可以在單鏈核酸分析中觀測(cè)到。通過(guò)對(duì)Nusinersen的分析發(fā)現(xiàn)BioTi能有效地改善色譜柱的靈敏度; 如圖3所示，與使用不銹鋼硬件的色譜柱結(jié)果對(duì)比，使用bioZen Oligo（BioTi硬件）時(shí)，分析靈敏度有了大幅度的提高。同時(shí)，此兩款色譜柱的色譜填料是同一個(gè)批次的填料。

綜上所述

從以上結(jié)果得出，使用生物惰性硬件的色譜柱不僅可以改善寡核苷酸在色譜分析中的效果和穩(wěn)定性，而且還可以大幅度地提高靈敏度，從而達(dá)到對(duì)合成寡核苷酸定量和表征的要求。

液相色譜條件 （圖1，2）：

色譜柱：

bioZen™ 2.6 µm Oligo (BioTi)

Clarity® 2.6 µm Oligo-XT (Stainless Steel)

規(guī)格：100 x 2.1 mm

產(chǎn)品貨號(hào)：

00D-4790-AN

00D-4746-AN

流動(dòng)相：

A：12.5 mM HFIP, 4 mM TEA 水溶液

B：12.5 mM HFIP, 4 mM TEA甲醇溶液

梯度：5-30 % B 于14分鐘內(nèi) （圖1）

流速：0.3 mL/min

進(jìn)樣量：12.5 ng

溫度：55 °C

檢測(cè)器：TOF-MS

樣品：siRNA

圖1：使用常規(guī)不銹鋼硬件的UHPLC色譜柱對(duì)siRNA進(jìn)行LC-MS分析

圖2：使用Bio-insert (生物惰性) 硬件的UHPLC色譜柱對(duì)siRNA進(jìn)行LC-MS分析

圖3：使用不銹鋼硬件與生物惰性硬件，Nusinersen 在LC-MS上分析效果的對(duì)比

艾杰爾-飛諾美潛心鉆研生物醫(yī)藥技術(shù)，持續(xù)以優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品質(zhì)量，快速的技術(shù)支持響應(yīng)和方法開(kāi)發(fā)服務(wù)于行業(yè)領(lǐng)域用戶，助力并加速提高全球的健康水平及幸福感。多年來(lái)相繼推出了蛋白、寡核苷酸、合成肽分析的生物分離液相色譜解決方案。