【飛諾美色譜】擁有良好的分離度是每一個色譜工作者都夢寐以求的事情，這里我們會詳細介紹分離度基本要素在方法開發(fā)過程中的重要性以及與分離方程之間關聯(lián)性。相信這對新手和有經(jīng)驗的色譜工作者都很有用。

分離方程被認為有三個項，它們各自反映了你的方法的柱效、選擇性和保留度。柱效對于在轉(zhuǎn)移到較短的色譜柱時保持方法的分離度至關重要。

下面是兩個GC分析色譜圖。我們可以發(fā)現(xiàn)，較短的色譜柱對色譜柱的選擇性和容量的影響可以忽略不計，在這兩個色譜圖中，內(nèi)徑（ID）和薄膜厚度保持不變。表1列出了我們應該注意的變量。

表 1 – 分離度變量

tR=保留時間

t0=“色譜柱容積"或“死體積"時間

t’=調(diào)整后的保留時間（取決于色譜柱容積）

α=選擇性（兩個峰的峰尖之間的關系）

k=容量因子（相對于固定相和方法條件的固有保留）

N=理論塔板（代表分析物與固定相之間的相互作用）

這兩個色譜圖代表了在使用新柱（長度正好是原始柱的一半）時保留時間和柱容積的比例效應。最終的效果是，我們的分離方程中的“選擇性"項和“保留度"項保持不變，其數(shù)學結(jié)果如表2所示。

表2 – 選擇性和保留度的對比

使用較短的色譜柱實際上會減少可用的理論塔板的數(shù)量，因為在較短的色譜柱上分析物與固定相相互作用的機會更少。這在第二張色譜圖中得到了證明，盡管在洗脫過程中，這些峰仍然能保持一定的峰形，但峰與峰之間的分離度降低了。

但如果在保持相比的情況下減小內(nèi)徑和薄膜厚度，從而提高柱效率（N），最終可以使我們的分離度恢復到原始方法的值。較窄的內(nèi)徑將增加分析物與固定相之間的相互作用頻率，而較薄的薄膜將增加分析物進出固定相時的傳質(zhì)速率。在第三張色譜圖中，內(nèi)徑和薄膜厚度被減小，使得兩個分析物的峰更尖銳，兩個峰之間的分離度也就更高。

柱效（N）代表峰的尖銳度和分析物與固定相之間相互作用的機會。柱效的計算考慮了峰的寬度和峰的保留時間。早期洗脫的峰通常具有較窄的寬度，顯示出其較高的柱效并可以提高該峰與相鄰分析物的分離度。

一半高度（W1/2）處的峰寬即一半高度處的實際寬度

GC和LC中都有一些技巧可以在縮短色譜柱的同時保持效率。在GC（氣相色譜）中，你可以保持相比的同時，減小內(nèi)徑和薄膜厚度，以增加分析物和固定相之間的相互作用的頻率和速度。在LC （液相色譜）中，更小的顆粒增加了相互作用的頻率，同時也增加了分析物進出顆粒以及相關固定相的速度。